1kb Ladder DNA Marker

產(chǎn)品名稱(chēng)

1kb Ladder

貨號規格

M1181/50次，M1182/50次×5

產(chǎn)品說(shuō)明

1kb Ladder是由10條雙鏈線(xiàn)狀DNA片段混合而成的DNA分子量標準（DNA Marker/ DNA Ladder），適用于確定500 bp至10 kb的線(xiàn)性雙鏈DNA片段大小，指示帶為2000 bp和5000 bp，便于電泳后觀(guān)察。每條帶都通過(guò)嚴格的物理定量可用于測定目的片段的大小和含量。

產(chǎn)品濃度為104 ng/μl。

條帶組成（bp）

500、1,000、1,500、2,000、3,000、4,000、5,000、6,000、8,000、10,000

建議上樣量

3-5 μl/次?？筛鶕蠘涌状笮∵x擇合適上樣量。

1kb ladder已預混上樣緩沖液，可直接進(jìn)行電泳分析。

建議電泳條件

8 cm  1%瓊脂糖凝膠，

1×TAE，7 V/cm，45 min。

保存條件

常溫保存半年，長(cháng)期保存請置于-20℃。

各條帶含量

指示帶     100 ng/5μl

非指示帶   40 ng/5μl

●  對于非變性凝膠電泳，Marker是否需要DNA變性?

答：本公司Marker產(chǎn)品中只有Lambda DNA Marker為質(zhì)粒酶切產(chǎn)物，在電泳上樣前如加熱處理可獲得最佳效果，其余產(chǎn)品均不需點(diǎn)樣前加熱處理；另外電壓太高也會(huì )使凝膠過(guò)熱和DNA變性造成帶型異常。

●  當DNA停留在凝膠點(diǎn)樣孔處時(shí)該怎么辦？

答：檢查膠濃度是否在適合分離DNA片段的范圍，點(diǎn)樣孔是否高質(zhì)，確保電泳的正負極正確，檢查電泳緩沖液是否具有緩沖能力，確保DNA樣品的純度，如進(jìn)行PCR產(chǎn)物的純化，確保樣本中沒(méi)有或只存在少量的DNA結合蛋白或其他可與DNA結合的化合物。

●  為什么DNA條帶不理想？

答：影響電泳條帶的因素很多，如凝膠種類(lèi)或濃度不合適，質(zhì)量不佳；上樣量過(guò)多或過(guò)少；樣本的純度不高，鹽濃度過(guò)高；電泳緩沖液緩沖能力不足，有核酸酶污染；電泳條件不正確；染色不充分或不均勻；跑膠后沒(méi)有及時(shí)拍照。

●  為什么定量數據不正確以及如何準確定量樣品？

答：樣品和Marker的上樣條件不同，參考條帶不正確，凝膠的不均勻染色或背景過(guò)高都會(huì )干擾凝膠定量結果。樣品DNA和Marker DNA在電泳前選用相同的上樣染料處理，調整樣品濃度，使其在凝膠中的含量與分子量最接近標準DNA條帶，樣品DNA和Marker的上樣體積盡量接近，樣品用1×上樣緩沖液稀釋?zhuān)欢繒r(shí)以分子量最接近的標準條帶為參照物，分析樣品條帶的含量；利用凝膠圖像分析軟件，如SensiAnsys可對DNA進(jìn)行準確定量，比目測條帶方法更精確。

●  為什么在變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠里電泳時(shí)會(huì )出現雜帶？

答：一般來(lái)說(shuō)，雙鏈DNA Marker不推薦用于變性電泳，否則會(huì )產(chǎn)生非正常帶型，即出現所謂的雜帶。這種出現異型帶的現象，在100 bp以下的條帶極易發(fā)生。當您的實(shí)驗不可避免的要使用變性聚丙烯酰胺/尿素凝膠進(jìn)行電泳時(shí)，我們建議，將樣品和Marker選用同樣的變性上樣緩沖液進(jìn)行變性處理后上樣，以消除二級結構。