RT-PCR Mix for qPCR（預混型逆轉錄試劑盒）

貨號：R1031   規格：100次（20 μl反應體系）

產(chǎn)品說(shuō)明

RT-PCR Mix for qPCR是預混型逆轉錄反應試劑盒，操作簡(jiǎn)便，可快速高效完成逆轉錄反應。其中Enzyme Mix含有高效逆轉錄酶和熱敏型DNase，一步完成基因組DNA的清除以及RNA的逆轉錄反應，RT Buffer包含逆轉錄反應所需的其他組分，無(wú)需分步多次加樣，降低了樣品污染的風(fēng)險。同時(shí)，本試劑盒配備了Control Mix，用于陰性對照反應，檢驗RNA模板中是否有基因組DNA殘留。本試劑盒的逆轉錄產(chǎn)物對染料法和探針?lè )晒舛?/span>PCR反應均有很好的兼容性，可進(jìn)行精準的基因表達分析。

產(chǎn)品組分

保存條件

各組分均-20℃保存，并避免反復凍融。

適用范圍

第一鏈cDNA 合成

注意事項

l 本品含有熱敏型DNase，請于冰上使用本品各組分。

l 為保證成分均勻，請將Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix分別瞬時(shí)離心、吹打混勻后再吸取使用。

l 在操作過(guò)程中，注意防止引入RNase導致RNA降解。RNA最好保存于-70℃，避免反復凍融。

l cDNA產(chǎn)物應置于-20℃或以下保存，避免反復凍融。

操作步驟

1. 配制反應體系

按以下體系，在冰浴的無(wú)菌無(wú)酶離心管中配制反應混合液：

陰性對照反應（可選）

即不加逆轉錄酶的反應，產(chǎn)物用于在qPCR中作為陰性對照，檢驗模板RNA中是否有基因組DNA殘留

按以下體系，在冰浴的無(wú)菌無(wú)酶離心管中配制反應混合液：

2. 進(jìn)行逆轉錄反應

將上述混合液吹打混勻，瞬時(shí)離心收集至管底。按以下程序，在PCR儀中進(jìn)行反應：

3. qPCR反應及cDNA保存

cDNA產(chǎn)物可稀釋后立即進(jìn)行染料法或探針?lè )?/span>qPCR反應。若使用未稀釋的cDNA原液，則體積不能超過(guò)反應體系的1/10，以避免抑制反應效率。長(cháng)期保存cDNA產(chǎn)物應于-20℃或以下環(huán)境中，并避免反復凍融。